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Annexin V和PI雙染法是流式檢測細胞凋亡的經典方法 ,它是基于凋亡的早期細胞膜上的磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine, PS)從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面這一原理來實現的(如下圖3)。 Annexin Ⅴ(膜聯蛋白 V) 是一種分子量為35-36 kDa的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,能與PS高親和力結合,將Annexin V 進行熒光素FITC標記,利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。
具體表現為: 細胞脹大,胞膜破裂,細胞內容物外溢,核變化較慢,DNA降解不充分,會引起局部嚴重的炎癥反應(如下圖所示)。 Annexin V和PI雙染法是流式檢測細胞凋亡的經典方法 ,它是基于凋亡的早期細胞膜上的磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine, PS)從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面這一原理來實現的(如下圖3)。
凋亡細胞 DNA 含量的流式細胞計分析 方法 收集細胞→70% 冷乙醇(PBS 稀釋)4 °C 固定過夜→PBS 洗滌,1 000 rpm × 10 min→RNase A(0.5 mg/ml)37 °C 消化 30 min→PI(50 mg/ml)染色,室溫避光 15 min→FACScan 分析 DNA 亞二倍體的形成及細胞 ...
然而,凋亡細胞調節上述過程的機制目前仍不清楚。 作者的研究結果發現,凋亡代謝物分泌組(secretome)不是簡單的被動排空細胞內容物,而是一個調控過程。 caspase介導的質膜PANX1通道開放,促進了細胞凋亡過程中持續釋放有活力的代謝物。